In diesem Kursmodul werden Sie an Ihrem Mikroskop eingewiesen und erlernen die praktischen proteinkristallographischen Fertigkeiten im Detail kennen
Nach diesem Modul:
Wissen Sie wie man das Kristallwachstum mit dem Mikroskop dokumentiert und die Kristallqualität beurteilt
Können Sie Proteine eigenständig per Sitting- und Hanging-Drop-Verfahren kristallisieren
Sind Sie in der Lage Proteinkristalle in flüssigen Stickstoff zu überführen
Haben Sie praxisrelevantes Wissen, um Ihre Proteinkristalle zum Synchrotron zu versenden
Ablauf des Moduls:
1
Inbetriebnahme des Mikroskops
Zu Beginn wird Ihr Mikroskop in Betrieb genommen. Dies bedeutet, dass die einzelnen Mikroskop-Bauteile zusammengesetzt werden. Anschließend wird die Mikroskop-Software installiert und entsprechend der Komponenten konfiguriert.
2
Einweisung in die Mikroskop-Software und Beurteilung der Kristallqualität
Zunächst erhalten Sie eine Einweisung in die Mikroskop-Software: Prinzipieller Aufbau, Einstellungen, Konfigurationsmöglichkeiten, Ausmessung von Proteinkristallen und Dokumentation. Anschließend werden Sie anhand mitgebrachter Kristallplatten am Mikroskop lernen, wie Sie die Qualität der Kristalle richtig einschätzten, so dass Sie möglichst gute Strukturen von Ihren kristallisierten Proteinen erhalten.
3
Proteinkristallisation
In diesem Abschnitt werden Sie praktisch lernen, wie Sie Ihre Proteine mittels Sitting- und Hanging-Drop-Verfahren kristallisieren. Darüber hinaus werden wir Sie auch in die Methodik des Seedings einführen, also das Kristallwachstum durch Zugabe von Kristallisationskeimen zu initiieren.
4
Konservierung der Proteinkristalle in flüssigen Stickstoff
Hier erlernen Sie die Technik, wie Sie Kristalle möglichst schonend in flüssigen Stickstoff überführen. Dieser Schritt erfordert aufgrund der brüchigen Beschaffenheit und geringen Größe (ca. 0,1 mm!) von Proteinkristallen sehr viel Übung. Zudem sind die Kristalle zum Teil an der Gefäßwand festgewachsen, befinden sich Unterhalb einer Präzipitanshaut oder stellen keine Einkristalle dar und müssen aus ihrem Kristallverbund isoliert werden.
5
Versand der Proteinkristalle zum Synchrotron
In diesem Teil des Praxis-Moduls zeigen wir Ihnen, wie Sie Ihre Kristalle sicher in den Versand-Dewar überführen und eine Aufrechterhaltung der Stickstoff-Atmosphäre sicherstellen.
6
Weiteres Praxis-relevantes Wissen
Im letzten Abschnitt erlernen Sie weitere Fähigkeiten, wie das Säubern und Kleben der Pins.
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